細(xì)胞培養(yǎng)——收到細(xì)胞的處理方式
細(xì)胞培養(yǎng)——收到細(xì)胞的處理方式
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細(xì)胞活化︰
1. 收到細(xì)胞株包裹時(shí)， 請(qǐng)檢查細(xì)胞株冷凍管是否有解凍情形， 若有請(qǐng)立即通知。細(xì)胞 株請(qǐng)盡速開始培養(yǎng)， 或立即冷凍保存(置于–70 °C， 隔夜后， 移到liq N2)。
2.冷凍細(xì)胞解凍程序:
2.1. 依據(jù)細(xì)胞株數(shù)據(jù)單指定之基礎(chǔ)培養(yǎng)基種類、血清種類和其它指定之成份和比 例， 制備培養(yǎng)基。絕大多數(shù)之細(xì)胞均無法立即適應(yīng)不同之基礎(chǔ)培養(yǎng)基或不同之 血清種類， 若因?qū)嶒?yàn)需要， 必須有所不同時(shí)， 務(wù)必以緩慢比例漸次改變培養(yǎng) 基組成， 確定細(xì)胞適應(yīng)后， 方進(jìn)行所需之實(shí)驗(yàn)。
2.2. FBS (fetal bovine serum, 胚牛血清), CS (calf serum, 小牛血清)和HS (horse serum, 馬血清)，對(duì)細(xì)胞而言差異極大，請(qǐng)務(wù)必依據(jù)細(xì)胞株資料單指定之血清種 類培養(yǎng)之。
2.3. 將培養(yǎng)基置于37 °C 水槽中回溫， 回溫后噴以70 % 酒精并擦拭之， 移入無 菌操作臺(tái)內(nèi)。取出冷凍管， 立即放入37 °C 水槽中快速解凍， 水面高度不可 接近或高過冷凍管之蓋沿， 否則易發(fā)生污染。輕搖冷凍管使其在1 分鐘內(nèi)全 部融化后， 以70 % ethanol 擦拭冷凍管外部， 移入無菌操作臺(tái)內(nèi)。
2.4. 依據(jù)細(xì)胞種類和濃度，于無菌操作臺(tái)內(nèi)取10 ml 培養(yǎng)基加至T25 或T75 flask 中。取出已解凍之細(xì)胞懸浮液，緩緩加入T25 或T75 flask 內(nèi)之培養(yǎng)基， 混 合均勻，放入37 °C，5 % CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
2.5. 對(duì)絕大多數(shù)細(xì)胞而言，1 % 以下之冷凍保護(hù)劑DMSO，不會(huì)對(duì)細(xì)胞之貼附或活 化有不佳影響，不需立刻由解凍細(xì)胞中去除， 待di二天確定細(xì)胞生長或貼附良 好后再去除即可。惟對(duì)極少數(shù)因?qū)MSO 敏感或會(huì)造成細(xì)胞分化之細(xì)胞，需 立即去除DMSO 者， 則可將解凍后之細(xì)胞懸浮液放入5 - 10 ml 培養(yǎng)基中， 離心300 xg (約1000 rpm)，5 分鐘，小心移去上清液，加入適量新鮮培養(yǎng)基， 將細(xì)胞均勻混合后， 轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶中， 再放入37 °C， 5 % CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
收到T25 flask 細(xì)胞時(shí)， 處理方式為︰
1. 于寄送過程中，為避免起泡造成細(xì)胞脫落死亡，T25 flask 均加滿培養(yǎng)基。請(qǐng)檢查 flask 外觀，并于顯微鏡下觀察細(xì)胞生長狀況和有無污染現(xiàn)象，若有任何問題， 不 要打開蓋子，請(qǐng)立即通知細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室。
2. 將原封之T25 flask 靜置于37 °C， 5 % CO2 培養(yǎng)箱中，使細(xì)胞回溫至37 °C， 并 讓運(yùn)送過程中少數(shù)脫落的細(xì)胞可再附著生長。隔天后，于無菌操作箱內(nèi)取出flask 內(nèi)之培養(yǎng)基，(取出之培養(yǎng)基可以再使用)，僅留約5-10ml 培養(yǎng)基于flask 內(nèi)，依 一般培養(yǎng)方式再將細(xì)胞置入培養(yǎng)箱中，或細(xì)胞已長滿盤， 則將細(xì)胞做傳代培養(yǎng)。
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